microRNA InstantPCR定量服务
microRNA是一类大小约为22个碱基的小RNA分子。它们在转录后阶段对基因表达进行调控。调控机制是通过与靶基因的mRNA互补序列结合，抑制蛋白质的翻译或降低mRNA的稳定性，从而抑制靶基因的表达。miRNA在细胞的发育，分化，生长等生命活动中起着重要调控作用。境象生物采用SYBR GreenI实时荧光PCR方法对您感兴趣的miRNA进行相对定量。
独创的microRNA定量PCR检测技术——双端延长技术
境象生物独创的microRNA检测“双端延长”技术，同时延长目标microRNA的5’和3’端，并为每个目标序列设计专一性的PCR引物， 5’专一性引物跨越延长序列和目标序列衔接部分，3’专一性引物跨越目标序列和延长序列衔接部分，从而保证了microRNA检测的灵敏度、专一性和低本底。
样品要求
- 组织样品（需提供≥100mg组织。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
- 体外培养细胞（需提供≥10^6个细胞。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
- 全血（需提供≥2ml全血）；
- 总RNA （需提供≥5ug total RNA）；
所有类型样品必须用冰袋寄至公司。冰块应足量，以确保样品寄至公司时，冰块未完全融化。
提交报告
服务报告提交下列数据：实时荧光PCR扩增曲线；熔解曲线；microRNA表达定量结果分析。
服务价格
根据具体服务内容询价
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收到样品后10-15个工作日
图1:hsa-miR-138-5P 9个梯度+NTC扩增曲线、线性关系、熔解曲线。模板在PCR体系中的量分别为4.3x109-4.3 x10 copies，0 copies（10倍梯度稀释，10个梯度）。A1和B1由于浓度过高，扩增曲线偏后，Ct值略偏低，A2-A9和B2-B9线性范围良好，A1-A9，B1-B9熔解曲线全部单峰，两组NTC均未扩增。
图2：15个miRNA中有10个可以检测到最低浓度（43个拷贝）的目标miRNA,8-9个梯度的线性关系良好， NTC未扩增或极少扩增，反转录引物的本底Ct值全部＞35。
图3: 在miRNA浓度达到4x107的情况下，8个相似miRNA用各自对应的反转录引物反转录后，用不同的PCR引物进行交叉试验，扩增结果ct值取2-△ct（交叉组/不交叉组），例：(sl-7a andPCR-7b) / (sl-7a andPCR-7a)。结果显示：除Sl-7a和PCR引物7a外，其他引物均没有交叉扩增。
