| 这种理解不全面。应该说，荧光探针PCR因为引入了专一性探针，PCR反应专一性增强了。但这并不意味着荧光探针PCR比荧光染料PCR定量更准确可靠。荧光探针在最理想的情况下，就是区别了专一性扩增产物和非专一性扩增产物，使得非专一性扩增产物不被检测到。假如一个充分优化的PCR反应，只有专一性扩增产物，没有非专一性扩增产物，那探针的作用就仅仅是产生荧光信号。但引入荧光探针，成本大大提高，而且体系变得复杂，优化也相对困难。很多荧光探针PCR经凝胶电泳分析有多种杂带，虽然因为探针能分辨专一性和非专一性产物，这些杂带是乎不影响专一性，但实质上对PCR性能是有影响的。第一，非专一性产物的存在，势必消耗反应体系资源，降低扩增效率；第二，非专一性产物的存在，影响PCR的灵敏度。而且PCR的规律是彼消我涨，在检测目标越少时，非专一性扩增影响越大。所以，非专一性产物的存在，势必降低PCR灵敏度。第三，假如定量标准没有出现非专一性产物而样品出现，那么定量结果会出现偏差。
荧光染料PCR不能区分专一性和非专一性产物，因此优化过程格外重要。但假如优化好了，没有非专一性产物，而且稳定，抗干扰性强，那么它的定量准确可靠。而且现在的实时荧光PCR仪都可以做溶解曲线。通过溶解曲线分析，能区分产物是否为引物二聚体。
在临床诊断上，从PCR实验到临床报告按固定的流程进行，一般不普遍对结果做多次重复，特别强调专一性，因此均采用荧光探针PCR。在科研上，一个重要结果会通过多种方法反复求证，由于荧光染料PCR的高性价比，科研上经常采用。 |